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中科院蘇州醫(yī)工所繆鵬課題組 Nano Lett.: CRISPR響應(yīng)的DNA水凝膠體系用于納米碰撞電化學(xué)傳感
2023-11-20  來源:高分子科技

  納米碰撞電化學(xué)可以以簡單、快速、高通量的方式實現(xiàn)生物偶聯(lián)與生物分子識別,近年來在分析各種單一生物待測物方面取得了重要進(jìn)展。然而,由于納米顆粒在電極表面的有效碰撞頻率較低,基于該技術(shù)的傳感策略靈敏度需要進(jìn)一步提升,迫切需要探索有效的信號放大策略。



  近期,中國科學(xué)院蘇州生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究所繆鵬研究員課題組提出了一種新型納米碰撞電化學(xué)傳感策略通過CRISPR響應(yīng)的DNA水凝膠和級聯(lián)DNA鏈置換信號放大,在絲網(wǎng)印刷電極表面進(jìn)行miRNA的無標(biāo)記檢測(圖1)。銀納米顆粒擴(kuò)散到電極表面時可以通過電化學(xué)氧化產(chǎn)生法拉第電流信號,電極表面金層和多硫化物層的修飾增強(qiáng)了銀氧化動力學(xué),提高了納米顆粒的碰撞頻率(圖2)。為了避免干擾和惰性黏附,銀納米顆粒被包封在DNA水凝膠中。在目標(biāo)miRNA存在的情況下,通過鏈置換聚合與催化發(fā)卡組裝兩步信號放大獲得了包含原間隔相鄰基序(PAM)的雙鏈DNA。該序列可以激活CRISPR/Cas12,反式切割DNA水凝膠中的連接單鏈導(dǎo)致凝膠到流體的相變,從而釋放銀納米顆粒。三重信號放大策略顯著提高了納米顆粒的有效碰撞頻率,對miR-141的檢測限低至4.21 aM。此外,該方法通過碰撞頻率進(jìn)行靶標(biāo)的量化克服了電流波動和納米顆粒異質(zhì)性的干擾,并在實際應(yīng)用中表現(xiàn)出高度特異性和穩(wěn)定性(圖3)。這項研究在核酸傳感方面具有廣泛的適用性,為開發(fā)無固定化和無標(biāo)記的納米電化學(xué)傳感提供了新的見解。該工作以“Nano-Impact Electrochemical Biosensing Based on a CRISPR-Responsive DNA Hydrogel”為題發(fā)表在《Nano Letters》上。文章第一作者是中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)博士研究郭嘉榮。該研究得到江蘇省杰出青年自然科學(xué)基金項目的支持。 


納米碰撞電化學(xué)策略用于miRNA檢測示意圖 


絲網(wǎng)印刷電極的修飾和銀納米顆粒的電化學(xué)碰撞A)多硫化物層的修飾;B)不同修飾電極的循環(huán)伏安圖;C)不同修飾電極上的電化學(xué)碰撞信號D)銀納米顆粒的電化學(xué)碰撞響應(yīng)。
 

3A)不同濃度miR-141 i-t曲線B)碰撞頻率與miR-141濃度對數(shù)的線性關(guān)系;C)傳感策略的選擇性研究D)標(biāo)準(zhǔn)緩沖液、人血清和細(xì)胞樣本加標(biāo)miRNA檢測結(jié)果。


  原文鏈接:https://pubs.acs.org/doi/full/10.1021/acs.nanolett.3c03448

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